简述纯化柱的规范使用方法
点击次数：59 更新时间：2026-01-21
纯化柱是色谱分析、样品前处理及生物制药中实现目标物分离、富集与净化的核心耗材，广泛应用于HPLC、SPE（固相萃取）、蛋白纯化及水处理等领域。其性能直接决定回收率、纯度与实验重复性。若操作不当，易因装填不均、流速失控、溶剂不兼容或再生失效，导致柱效下降、背压升高甚至柱床干裂。掌握纯化柱的规范使用方法，是实现分得清、收得高、用得久的关键保障。
一、使用前准备
充分活化：
反相柱（如C18）先用甲醇或乙腈冲洗5–10柱体积，再转至水相；
离子交换柱用高盐缓冲液平衡；
避免干柱上样，防止气泡滞留破坏流路均匀性；
溶剂互溶过渡：样品溶剂与初始流动相需互溶，否则易析出沉淀堵塞柱头。
二、上样与洗脱
上样量适中：不超过柱载量（通常≤5%柱体积），过载会导致峰拖尾或穿透；
流速合理匹配：
分析柱：0.5–2mL/min；
制备柱：按线速度（cm/h）计算，避免过高流速降低分离效率；
梯度洗脱优化：缓慢改变洗脱强度，提升分辨率，尤其对复杂混合物。
三、柱后处理
清洗：
反相柱：先用水/有机相（如95:5）冲洗盐分，再用高比例有机相（如90%甲醇）保存；
蛋白纯化柱：用0.5MNaOH或20%乙醇消毒，去除内毒素与微生物；
正确保存：
反相柱存于甲醇/乙腈中；
亲水柱（如HILIC）可存于乙腈/水（90:10）；
禁止将含缓冲盐的柱子直接放入纯有机相，防止盐析结晶堵塞。
四、压力与温度监控
背压异常预警：压力突升可能因筛板堵塞，需反冲或更换入口滤片；
控温使用：高温可提升传质效率，但超过柱温限（通常60℃）会加速键合相水解。
五、再生与寿命管理
定期再生：
C18柱可用强溶剂（如异丙醇）冲洗强保留杂质；
离子交换柱用NaCl梯度洗脱残留蛋白；
记录使用次数：建立《纯化柱日志》，标注样品类型、压力变化、理论塔板数，预判更换周期。
六、安全与禁忌提醒
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